目前国内应用最多的免疫组化笔，也被称为PapPen，DAKOPEN笔、免疫组织化学PAP笔、超级免疫组化笔、PAP笔或SuperPapPen，它是一种在医疗领域广泛应用的工具。它不仅在医院和癌症研究机构中被频繁使用，还在动物检疫站以及高等教育机构的病理学、细胞生物学、化学和免疫组织化学实验室中发挥着重要作用。使用这种笔的步骤包括：首先对组织切片进行脱蜡和水化处理，随后用纸巾轻轻擦去玻片上组织边缘的多余液体。接下来使用免疫组化笔在玻片上的样本周围画圈，然后让其自然干燥大约10至15秒。
免疫组化笔的使用背景：
免疫组化技术是一种广泛应用于临床病理学和科学研究中的检测方法，它利用带有标记的特定抗体来识别和定位组织中的抗原，并用于检测细胞内的原位表达。在进行免疫组化实验时，使用免疫组化笔对载玻片边缘进行封闭是一个至关重要的步骤，这样做有助于避免抗体的不必要扩散和溢出，从而减少试剂的消耗，有效降低实验成本。然而，目前市面上的免疫组化笔在对载玻片边缘超过2mm的区域进行封闭时，操作起来既耗时又费力。除此之外，这些笔还存在一些问题，如价格高、化学气味刺激、液体石蜡的流动性问题，以及可能导致组织污染的过量流出等，这些问题都可能对实验结果产生负面影响，显示出这些工具在实际应用中的局限性。近年来随着多色荧光免疫组化、RNA原位杂交技术在临床和基础研究中的广泛应用，现有的免疫组化笔的缺点更为突出，严重阻碍新技术、新方法的开展应用。
多重荧光免疫组化（mIHC）通常在一张切片上进行6-8种抗体的免疫组化染色，需要花费2-3天的时间进行6-8轮的一抗和酶联二抗孵育、TSA显色，煮沸洗脱抗体后再进行下一轮染色，目前的免疫组化笔都不耐热，加热后疏水圈都会溶解脱落，每次用含洗涤剂的缓冲液清洗会也对疏水圈有所溶解破坏，在染色过程中需要经过数十次缓冲液清洗，需要经常不断地用免疫组化笔加固疏水圈，防止染色试剂的流失，不然将导致实验的失败。
RNA原位杂交技术可以应用于多种类型的样本，包括石蜡包埋样本、冰冻样本、贴壁细胞以及悬浮细胞样本等。近年来，随着转录组分析在癌症研究中的广泛应用，RNA与蛋白质一样可以作为临床诊断、治疗评估及预后预测的生物学指标。因此，RNA原位杂交在肿瘤精准诊疗中的应用尤为重要，其精确检测目标RNA的能力对于癌症的研究和治疗具有重要意义。
RNAscope是2011年美国ACD公司基于持有专利的双Z型探针设计的原位杂交技术，它可以在组织或细胞原位检测单一分子RNA。这种技术通过寡核苷酸互补配对的信号放大系统，结合酶催化底物，使得在显微镜下可以看到荧光或可见光的信号。RNAscope不仅实现了单一分子RNA的原位检测，而且可以在一张组织切片上最多标记4个不同的RNA分子。RNAscope技术以其能放大特异性信号而非噪音信号的专利探针设计方法，显著提高了RNA检测的敏感性和准确性。这使得RNAscope成为RNA原位杂交领域的金标准，并代表了该领域的一项重大进步。RNAscope技术操作步骤多、试剂昂贵，需要经过高温修复组织、酶消化、三级信号放大、酶标抗体信号放大及显色、每个染色步骤后的多种缓冲液清洗等，对疏水圈的要求极高，免疫组化笔的应用成了影响实验成功的关键因素。美国ACD公司推荐使用ImmEdge® Hydrophobic Barrier PAP Pen（H-4000），如使用其它品牌的免疫组化笔因在染色过程中疏水圈容易破坏导致试剂流失，最终影响到原位杂交的结果。但ImmEdge® Hydrophobic Barrier PAP Pen（H-4000）价格昂贵，每支价格高达1226元，严重阻碍了该笔的广泛应用。
RNA原位杂交疏水笔的创新点
目前，商业化的免疫组化笔液体配方均为国外研制，国内主要为凡士林、石蜡等简单的混合液，或者中性树胶、聚二甲基硅氧烷、气相二氧化硅等疏水性材料，溶剂一般为酒精、甲苯、二甲苯、丁酮、丙酮、环己酮等有毒溶剂。此外目前商品化的免疫组化笔液贴片和疏水效果差，且价格昂贵。本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种附着力强、疏水性好、成本低、无苯环保的RNA原位杂交疏水笔液体及其制备方法。本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：一种RNA原位杂交疏水笔液体，该液体采用无苯环保的混合溶剂，选用高分子纳米材料、增稠剂、染料等主要成分。
使用RNA原位杂交疏水笔的优势
1、节省试剂的使用、减少实验的成：RNA原位杂交疏水笔可节省试剂,降低运行RNA原位杂交、免疫组化（IHC）和多重荧光免疫组化（mIHC）实验的成本。 建立疏水屏障的目的是为了防止试剂扩散流失、减少试剂的使用和实验的成本。道理很简单，使用一半的试剂量来完全覆盖组织切片意味着可节省50%的试剂，特别是实验步骤繁多、试剂有昂贵的RNA原位杂交实验。但是没有任何一部分的节约使你的组织受损和破坏你的实验值得，RNA原位杂交疏水笔消除了麻烦,使节省试剂和研究经费的目标成为可能。
2、疏水性能优异、笔膜附着力强：RNA原位杂交疏水笔划圈后可在不影响实验结果的前提下有效减少试剂的使用量，并避免表面试剂流失造成的干片、脱片。疏水圈可耐受各种缓冲液的浸洗和加热修复，笔膜附着力强，使用数天不脱落。
3、确保实验的灵活性：使用RNA原位杂交疏水笔，可以在同一张玻片上分离出不同的组织切片,并用不同的试剂进行染色。这在很多情况下都是很方便的，比如在比较不同的主抗体与相同的表位时。在可视化过程中,您不需要在几个幻灯片之间切换,只需在2-6个组织切片间滑动即可。因此,成像切片和比较来自每个抗体的结果更容易和更快。同样适用于滴定实验。当您不需要在多个幻灯片之间进行切换时,样本可视化和图像采集将会流得更快。
4、优良的热稳定性：RNA原位杂交疏水笔是热稳定的 ，可以难受各种缓冲液煮沸或高压修复抗原30分钟以上，耐高温的能力使RNA原位杂交疏水笔能适用于多种染色技术，如RNA原位杂交、免疫组化、免疫细胞化学和多重荧光免疫组化、免疫荧光染色等多种染色方法。特别是适用于5-8色的多重荧光免疫组化（mIHC）染色，5-8轮的热修复不会影响疏水屏障的效能，一次划圈可以将确保实验结束。 杂交带来的成本削减效益与IHC和联合国试验相同。然而,所选的阻隔法需要在协议中所示的杂交温度下提供稳定性。耐热PAP笔也给你在进行热诱导表位检索前应用疏水屏障的灵活性。
5、RNA原位杂交疏水笔的环保无毒： 高分子纳米材料结合无苯环保溶剂组成优良牢固的疏水屏，RNA原位杂交疏水笔也是一个环保的选择。它提供高质量的结果，但不含臭氧消耗碳氢化合物，也无苯无毒，可以放心使用，节省试剂和研究经费的同时也不会以牺牲环境和健康为代价。
6、染色结束后疏水圈容易清除：染色结束后可以使用任何清除试剂，如二甲苯、丙酮等都可以去除疏水圈，RNA原位杂交疏水笔笔膜也可以与中性树胶兼容，可以直接滴加中性树胶后加盖盖玻片，笔膜与中性树胶兼容透明无痕，不影响染色结果的观察。
7、应用广泛且便捷：RNA原位杂交疏水笔不仅适用于石蜡切片，还能方便地用于冰冻切片和细胞涂片。此外，它兼容RNA原位杂交、多重荧光免疫组化（mIHC）、多种免疫组化染色技术，包括SP、LSAB、ABC和PAP等，使得实验操作更加灵活。
产品介绍：
用于染色实验前对固定于载玻片的组织进行阻水处理，可在不影响实验结果的前提下有效减少试剂的使用量，并避免表面试剂流失造成的干片、脱片。
RNA原位杂交疏水笔HJ-4006
应用范围:
RNA原位杂交、免疫组化（IHC）和多重荧光免疫组化（mIHC）、免疫荧光染色、特殊染色等实验。 |
